人用狂犬病疫苗的免疫機制、毒株及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：重慶狂犬抗體檢測指南

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1、泓域健康/重慶狂犬抗體檢測人用狂犬病疫苗的免疫機制、毒株及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一、 人用狂犬病疫苗的免疫機制、毒株及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)狂犬病病毒RNA編碼核蛋白（N）、M1、M2、病毒包膜糖蛋白（G）和L五種蛋白，其中G蛋白是狂犬病病毒最主要的抗原，可有效刺激特異性輔助性T細胞和細胞毒性T細胞（CTL）增生，并誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性抗體。G蛋白特異性抗體是狂犬病疫苗最重要的保護性抗體，免疫效果主要依賴其抗原表位、結(jié)構(gòu)、蛋白折疊及糖基化等。N蛋白也是一種有效的保護性抗原，能夠刺激B細胞和Th細胞誘導(dǎo)產(chǎn)生細胞和體液免疫。磷蛋白（P）可誘導(dǎo)CTL，但保護作用較弱。機體在接種狂犬病疫苗約7天左右產(chǎn)生IgM抗體，在約14天后產(chǎn)生

2、IgG抗體并迅速升高。IgM和IgG抗體均具有中和病毒的能力，有些中和抗體能進入感染狂犬病病毒的神經(jīng)細胞內(nèi)抑制病毒復(fù)制。CTL的高峰出現(xiàn)在免疫后12天，可清除中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的狂犬病病毒，Th細胞可增強抗核蛋白和糖蛋白抗體，也能增加保護效果。但Suss的研究認(rèn)為細胞免疫在狂犬病中的作用不明。由于狂犬病病毒核蛋白序列高度保守，氨基酸同源性達78%至93%，故病毒之間在核殼體水平上存在著廣泛的抗原交叉反應(yīng)。狂犬病病毒的主要抗原部位為G蛋白外功能區(qū)，當(dāng)其氨基酸同源性74%時，病毒之間能夠交叉中和，為同一遺傳譜系內(nèi)的病毒；膜外區(qū)的氨基酸同源性62%時，則無交叉中和反應(yīng)。目前疫苗株均屬于遺傳譜系I，對遺傳

3、譜系II中的病毒感染不具保護作用?，F(xiàn)已經(jīng)有十余個種類或基因型的狂犬病病毒屬病毒被描述為狂犬病的病原體。目前為止，遺傳譜系I的狂犬病病毒是引起人狂犬病的最常見的病毒型別，也是至今應(yīng)用于狂犬病疫苗生產(chǎn)的唯一病毒種類。故現(xiàn)有疫苗可能無法為遺傳譜系I外的其他血清型病毒感染提供保護。因此，用于疫苗的病毒種類必須慎重選擇。生產(chǎn)用毒種應(yīng)是在實驗室細胞培養(yǎng)適應(yīng)和減毒，并具有穩(wěn)定生物學(xué)特性的固定毒株，其歷史和來源應(yīng)確證清楚，并經(jīng)過全面的特征性檢定，符合國家相關(guān)文件的要求。病毒滅活后制成的疫苗對人體安全且能產(chǎn)生有效的免疫保護作用。WHO推薦用于疫苗生產(chǎn)的病毒固定毒株包括PasteurVirus、Pitman-Mo

4、ore、Vnukovo-32、Flury雞胚細胞低傳代株和CTN株等。人用狂犬病疫苗應(yīng)符合WHO生物制品標(biāo)準(zhǔn)專家委員會（ECBS）制定的指導(dǎo)原則中對疫苗特性、生產(chǎn)及質(zhì)量控制的要求。用于制備疫苗的細胞基質(zhì)應(yīng)來源于健康動物，動物來源品系清楚。根據(jù)現(xiàn)行中國藥典的要求，動物必須是清潔級或以上的動物。所用動物應(yīng)符合實驗動物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)檢測要求的相關(guān)規(guī)定。人二倍體及傳代細胞應(yīng)在限定代次內(nèi)使用。病毒在細胞（或胚蛋）中增殖后，將收獲的病毒進行濃縮、純化、滅活，加入保護劑凍干而成。細胞培養(yǎng)疫苗的最低效價為在效期內(nèi)每一劑肌注劑量達25IU以上，由NIH法檢測確定。ELISA法檢測糖蛋白等其他體外測定方法目前

5、仍處于實驗室驗證階段，但該方法已用于生產(chǎn)過程中抗原含量的控制。疫苗需經(jīng)臨床前研究及臨床試驗，企業(yè)需獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)的生產(chǎn)許可證方可生產(chǎn)疫苗。WHO建議對新申請注冊的疫苗，在臨床試驗中檢測0、14、28/30、180、360天血清中和抗體水平。已經(jīng)獲準(zhǔn)生產(chǎn)的人用狂犬病疫苗需按照國家食品藥品監(jiān)督管理總局的要求申請批簽發(fā)，僅有獲得批簽發(fā)合格證的狂犬病疫苗批次方可上市使用。二、 凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）批簽發(fā)量較多按照培養(yǎng)基質(zhì)分品種進行統(tǒng)計，目前Vero細胞狂犬病疫苗是主流產(chǎn)品。凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）的批簽發(fā)量為620129萬支，市占率為7527%;人用狂犬病疫苗

6、（Vero細胞）的批簽發(fā)量為110318萬支，市占率為1339%;地鼠腎細胞狂犬病疫苗的批簽發(fā)量為53457萬支，市占率為649%;最后是人二倍體細胞狂犬病疫苗的批簽發(fā)量為39931萬支，市占率為485%。由此來看，二代狂犬病疫苗（Vero細胞基質(zhì)）仍然占據(jù)主導(dǎo)地位，三代狂犬病疫苗（人二倍體細胞基質(zhì)）正在逐步崛起。三、 常用細胞培養(yǎng)狂犬病疫苗比較我國已上市的狂犬疫苗產(chǎn)品根據(jù)使用細胞基質(zhì)不同可分為：二倍體細胞、Vero細胞（非洲綠猴腎細胞）、地鼠腎細胞及雞胚細胞，其中Vero細胞是目前應(yīng)用最為廣泛的動物細胞基質(zhì)，Vero細胞更容易生產(chǎn)和儲存，狂犬病毒表達滴度高，因此，Vero細胞狂犬疫苗具有生產(chǎn)

7、控制水平高、產(chǎn)量大、生產(chǎn)成本較低的優(yōu)勢。但Vero細胞屬于傳代細胞，高濃度的Vero細胞DNA存在致腫瘤風(fēng)險。此外，市場上的Vero細胞狂犬病疫苗均使用動物來源的血清和胰酶，產(chǎn)品存在外源病毒因子污染風(fēng)險。人二倍體細胞疫苗是第三代狂犬病疫苗，與動物細胞相比，人二倍體細胞狂犬病疫苗具備天然的安全性優(yōu)勢，無致腫瘤風(fēng)險，雜質(zhì)去除要求低，被世界衛(wèi)生組織稱為預(yù)防狂犬病的黃金標(biāo)準(zhǔn)疫苗，是目前國內(nèi)傳統(tǒng)狂犬病疫苗的有力補充，尤其適用于過敏體質(zhì)者、老人及兒童等免疫力偏低的人群。但人二倍體細胞存在培養(yǎng)難度高，狂犬病毒表達滴度低等問題，因此人二倍體細胞狂犬病疫苗產(chǎn)量較低、生產(chǎn)成本高。目前，我國獲批簽發(fā)上市的人用狂犬病

8、疫苗企業(yè)共有8家。2018-2020年，我國利用Vero細胞基質(zhì)培養(yǎng)的人用狂犬疫苗批簽發(fā)數(shù)量占比最大，保持在90%左右；人二倍體細胞狂犬疫苗整體呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢。四、 狂犬病疫苗批簽發(fā)量呈現(xiàn)平穩(wěn)波動的態(tài)勢由于狂犬病患病高死亡率，狂犬病疫苗使用接種尤為剛性，人用狂犬病疫苗是我國常年批簽發(fā)量較大的疫苗品種之一。近年來，國內(nèi)狂犬疫苗每年的批簽發(fā)總量維持在6000-8000萬支，即1200-1600萬人份（4-5針/人份），2020年我國全年批簽發(fā)各類狂犬疫苗大約8238萬劑，較2019年同期增長4004%。2021年第一季度，狂犬病疫苗批簽發(fā)量為1439萬支，同比增長3019%。五、 當(dāng)前狂犬疫

9、苗發(fā)展面臨的問題與困境疫苗的質(zhì)量直接關(guān)系到國家公共衛(wèi)生健康與安全，下一代人類疫苗通常是為了減少不良事件或提高現(xiàn)有疫苗的功效而開發(fā)的。目前上市的幾款狂犬疫苗在預(yù)防狂犬病方面已經(jīng)取得了巨大的成功，但仍然存在一定的局限性，因此仍然需要利用現(xiàn)代生物技術(shù)進一步改進完善。疫苗本身開發(fā)模式具有特殊性：研發(fā)即生產(chǎn)。車間產(chǎn)能的持續(xù)迭代背后存在大量時間成本、審批成本，產(chǎn)量決定了臨床規(guī)模及商業(yè)化規(guī)模。血清問題：無血清培養(yǎng)是狂犬疫苗研制中世界性的技術(shù)難題，疫苗生產(chǎn)均使用動物來源的牛血清和豬胰酶，產(chǎn)品存在外源病毒因子污染風(fēng)險，給后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn)帶來挑戰(zhàn)。降血清至無血清是國內(nèi)疫苗生產(chǎn)企業(yè)共同的研究趨勢。二倍體狂犬疫苗安全性強

10、，為狂犬疫苗未來主要發(fā)展趨勢之一。但存在成本高、制備困難、產(chǎn)量低、大規(guī)模培養(yǎng)難度較大等技術(shù)問題。免疫程序的選擇：世衛(wèi)組織已經(jīng)批準(zhǔn)了不同的方案，例如兩點皮內(nèi)注射（0，3和7天）；單點肌肉注射（0，3，7天和第14-28天之間）和3周肌肉注射（0天x2，7天x1和21天x1）疫苗接種。目前國內(nèi)狂犬病疫苗接種程序所采用的是肌內(nèi)接種，即五針法（0，3，7，14，28天）和2-1-1法（0天x2，7天x1和21天x1）。選擇最佳的免疫接種程序可有效降低成本和劑量。中國的犬?dāng)?shù)超過1億只，其中大部分在農(nóng)村散養(yǎng)。消除狂犬病必須免疫動物，而與歐洲等發(fā)達國家的動物普遍免疫不同，中國接種疫苗的動物比例較少。因此，人

11、用狂犬病疫苗屬于剛性需求。隨著人均可支配收入的增加，國內(nèi)民眾將愈發(fā)重視對疾病的預(yù)防和管理。隨著中國人均可支配收入快速增長，人們付費接種疫苗的意愿和能力也將隨之提高。此外，教育程度的提升會提高狂犬病疫苗接種率，這將促進人用狂犬病疫苗的銷量增長。未來隨著國內(nèi)企業(yè)在疫苗領(lǐng)域研發(fā)投入的加大，優(yōu)質(zhì)的技術(shù)+充足的產(chǎn)能，將助力患者的可及性持續(xù)提升，推動狂犬疫苗長期可持續(xù)發(fā)展?？袢∈怯煽袢《疽鸬娜双F共患傳染病。幾乎所有溫血動物都對狂犬病毒易感，其中犬類是主要宿主?？袢≈饕ㄟ^動物咬傷后，唾液中的狂犬病毒經(jīng)破損皮膚侵入體內(nèi)傳播?？袢∈瞧駷橹谷祟惒∷缆首罡叩募毙詡魅静?，一旦發(fā)病死亡率接近100%，即使

12、治愈也會留下嚴(yán)重后遺癥。目前對狂犬病缺乏有效的治療手段，因此使用狂犬疫苗預(yù)防是關(guān)鍵。隨著我國狂犬病預(yù)防的加強，發(fā)病人數(shù)及病死人數(shù)逐年下降。從發(fā)病病例來看，自2007年起，我國狂犬病發(fā)病病例逐步下降，目前，據(jù)國家衛(wèi)健委數(shù)據(jù)，2021年我國狂犬病發(fā)病病例降至157例。六、 人用+寵物用雙管齊下，助力狂犬病防控我國對狂犬病的防控，至今已有30年。2014年，康華生物的人二倍體細胞狂犬病疫苗（HDCV）獲批上市，開啟了我國國產(chǎn)狂犬病疫苗的人源新時代。HDCV在免疫效果和起效速度方面優(yōu)勢明顯，免疫持續(xù)時間可達10年，不良反應(yīng)發(fā)生率低于1%，適用全人群（包括兒童、老人及孕婦），被視為預(yù)防人類狂犬病的金標(biāo)準(zhǔn)

13、疫苗。此次啟動的中國寵物狂犬病疫苗現(xiàn)狀調(diào)研項目將覆蓋寵物醫(yī)院、寵物美容店，通過調(diào)查每年接種疫苗的犬、貓數(shù)量，以及寵物主人對于為犬和貓接種疫苗的認(rèn)知和行為習(xí)慣，以期為狂犬病控制和預(yù)防提供新的思路和策略參考，促進行業(yè)發(fā)展。據(jù)透露，未來還將推出新一代、高標(biāo)準(zhǔn)、引用人用狂犬病疫苗生產(chǎn)技術(shù)的寵物狂犬病滅活疫苗，配合人二倍體細胞狂犬病疫苗（HDCV），從人用和寵物用兩個方向加強狂犬病的防控。在中國，狂犬?。≧abies）是一個重大的公共衛(wèi)生問題，20152018年更是導(dǎo)致每年幾百人死亡，超過95%的人類狂犬病病例來源于患狂犬病的狗。雖然狂犬病是一種嚴(yán)重的人獸共患病，但狂犬病病毒（Rabiesvirus，R

14、ABV）在我國現(xiàn)行動物庫內(nèi)的循環(huán)和分布并不清楚。七、 國內(nèi)狂犬疫苗市場持續(xù)增長近年來，隨著我國狂犬病預(yù)防教育普及、人用狂犬病疫苗接種數(shù)量增加，我國狂犬病預(yù)防工作取得了重大進展，在控制狂犬病發(fā)病率方面起到了重要作用。2018年，中國人用狂犬疫苗市場規(guī)模達到284億元，預(yù)計2022年將達到387億元的市場規(guī)模。Vero細胞人用狂犬病疫苗是狂犬病疫苗市場的主導(dǎo)者，占據(jù)750%的市場份額；人二倍體細胞培養(yǎng)狂犬病疫苗和原代細胞培養(yǎng)狂犬病疫苗（包括地鼠腎細胞人用狂犬病疫苗和雞胚細胞人用狂犬病疫苗）分別占據(jù)182%和68%的市場份額。中國疾病預(yù)防控制中心報告顯示，我國狂犬病疫情主要分布在人口稠密的華中、華南、西南、華東地區(qū)。人群分布上呈三多特征：農(nóng)村地區(qū)病例較多、15歲以下兒童和50歲以上人群發(fā)病較多。中國的犬?dāng)?shù)超過1億只，其中大部分在農(nóng)村散養(yǎng)。消除狂犬病必須免疫動物，而與歐洲等發(fā)達國家的動物普遍免疫不同，中國接種疫苗的動物比例較少。因此，人用狂犬病疫苗屬于剛性需求。隨著人均可支配收入的增加，國內(nèi)民眾將愈發(fā)重視對疾病的預(yù)防和管理。隨著中國人均可支配收入快速增長，人們付費接種疫苗的意愿和能力也將隨之提高。此外，教育程度的提升會提高狂犬病疫苗接種率，這將促進人用狂犬病疫苗的銷量增長。