四川農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文答辯用幻燈片PPT演示課件

齊口裂腹魚GtH-R基因的克隆及其序列分析,.,目的,目 錄,1,材料與方法,2,結(jié)果,3,結(jié)論,4,參考文獻,5,致謝,6,.,1 目的,促性腺素受體（GtH-R）屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，其與促性腺激素（GtH）結(jié)合后可促進卵母細胞的成熟以及在精子發(fā)生的最后幾個時期起主要作用。 魚類中GtH基因除了在性腺中有豐富的表達外，在非性腺組織中也有少量或微量表達；可是還沒有人對齊口裂腹魚垂體組織中GtH-R基因進行克隆及序列分析，因此通過完成本次試驗，為進一步研究齊口裂腹魚的繁殖調(diào)控機制提供了一些基礎數(shù)據(jù)。,.,2 材料與方法,2.1 試驗材料齊口裂腹魚平均體長為30-40cm； 平均體重為0.5-1.0kg。采集齊口裂腹魚垂體組織樣品，置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2 引物設計與合成 根據(jù)NCBI上斑馬魚GtH-R的cDNA序列，選取保守區(qū)序列；上游引物為5CATCCGTCGAGGACACTTTCGGTA3，下游引物為5ACACATAGCATCCGCAAATCACGAG3，委托華大基因科技有限公司進行特異性引物合成。,.,2.3 方法,引物設計與合成,反轉(zhuǎn)錄反應,PCR擴增,PCR產(chǎn)物回收,克隆測序,序列分析,總RNA提取,.,3 結(jié)果,圖1 齊口裂腹魚垂體組織總RNA 1%瓊脂糖凝膠電泳圖,圖2 齊口裂腹魚GtH-R 基因PCR電泳檢測圖,3.1 總RNA提取結(jié)果,3.2 RT-PCR產(chǎn)物檢測,.,3.3 GtH-R核酸序列比對,圖3 齊口裂腹魚GtH-R基因cDNA部分編碼核酸序列分析,齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚齊口裂腹魚斑馬魚鯉魚,GtH-R基因編碼核酸的測序結(jié)果與Genbank上斑馬魚序列進行相似性分析，相似性達93.0%，與鯉魚的相似性為92.6%。,.,3.4 氨基酸相似性分析,GtH-R基因編碼氨基酸序列的測序結(jié)果與Genbank上斑馬魚的序列進行相似性分析，相似性達97%以上。,圖4 齊口裂腹魚GtH-R氨基酸序列及序列分析,.,3.5 GtH-R氨基酸組成分析,亮氨酸（Leu）含量為最高，達到了16.45%，賴氨酸（Lys）含量最低，只有0.87%；其它具體的氨基酸組成類型及酸值見表1。,表1 齊口裂腹魚GtH-R基因編碼的氨基酸組成,圖5 齊口裂腹魚GtH-R基因編碼的氨基酸組成,.,3.6 GtH-R的氨基酸疏水性分析與抗原決定簇預測,GtH-R 基因編碼的氨基酸疏水性中存在4個疏水區(qū)，分別位于第57、90、132和186氨基酸殘基附近;而氨基酸序列中則存在4個抗原決定簇，分別位于第27、34、112和159氨基酸殘基附近。,圖6 齊口裂腹魚GtH-R氨基酸的平均疏水性比例,圖7 齊口裂腹魚GtH-R蛋白抗原決定簇預測,.,3.7 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的預測,圖8 齊口裂腹魚GtH-R蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預測h表示螺旋；e表示折疊；c表示無規(guī)則卷曲,折疊占15.24%,螺旋占61.43%,無規(guī)則卷曲占23.33%,.,3.8 蛋白質(zhì)磷酸化位點分析,由上圖可知，GtH-R蛋白中含有4個磷酸化位點，全是Ser（Serine絲氨酸）位點有4個，沒有Thr（threonine蘇氨酸）、Tyr（tyrosine酪氨酸）。,圖9 齊口裂腹魚LHR蛋白磷酸化位點預測,.,4 結(jié)論,此次試驗得到的結(jié)果顯示：獲得的齊口腹裂魚GtH-R基因的長度為696 bp；與斑馬魚的序列相似性較高，表明同源性較近，其基因具有較高的保守性。對氨基酸和蛋白質(zhì)分析顯示：螺旋占的比例大，存在4個抗原決定簇和4個疏水區(qū)；說明GtH-R蛋白柔性好，是油溶性受體蛋白的可能性強。 最后得出齊口裂腹魚GtH-R基因的保守性高，同時也為進一步研究齊口裂腹魚的繁殖調(diào)控機制提供了一些基礎數(shù)據(jù)，而具體的調(diào)控機制則有待進一步的研究。,.,5 參考文獻,1 Kraak GVD, Suzuki K, Peter RE, et al. 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