鞭毛染色法及活菌活動(dòng)性觀察一

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,*,*,鞭毛染色法及活菌活動(dòng)性觀察,第一頁(yè)，共十頁(yè)。,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?了解細(xì)菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色的方法；學(xué)習(xí)用壓滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。,第二頁(yè)，共十頁(yè)。,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)菌的鞭毛極纖細(xì)，直徑一般為,0.10.2um,，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。,鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。,常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。,第三頁(yè)，共十頁(yè)。,采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態(tài)、著生位置和數(shù)目，但此法既費(fèi)時(shí)又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛，可采用懸滴法或壓滴法直接在光學(xué)顯微鏡下檢查活細(xì)菌是否具有運(yùn)動(dòng)能力，以此來(lái)判斷細(xì)菌是否有鞭毛。此法較快速、簡(jiǎn)便。,懸滴法就是將菌液滴加在潔凈的蓋玻片中央，在其周邊涂上凡士林，然后將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央，即可放置在普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。,壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上，然后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。,第四頁(yè)，共十頁(yè)。,三、實(shí)驗(yàn)器材,1.,菌種：蘇云金芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單細(xì)胞菌,2.,染色液和試劑：硝酸銀染色液、香柏油、二甲苯、,0.01,美蘭水溶液。,3.,儀器、材料：載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號(hào)筆、鑷子、接種環(huán)，顯微鏡。,第五頁(yè)，共十頁(yè)。,四、實(shí)驗(yàn)方法,（一）硝酸銀染色法,1.,清洗玻片 選擇光滑無(wú)裂痕的玻片，置洗衣粉過(guò)濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過(guò)濾，以除去粗顆粒），煮沸,20min,。取出用清水沖洗，瀝干水后，置,95%,乙醇中浸泡，用時(shí)取出在火焰上燒去酒精。,2.,菌液的制備：菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛，所以在染色前應(yīng)將待染細(xì)菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上連續(xù)移接,3-5,代，以增強(qiáng)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)力。最后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng),1216h,。然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán)，移至盛有,12mL,無(wú)菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在,37,恒溫箱中靜置,10min,（放置時(shí)間不宜太長(zhǎng)，否則鞭毛會(huì)脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開(kāi)。,第六頁(yè)，共十頁(yè)。,3.,制片：吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。,4.,染色,滴加,A,液，染,3-5min,；,用蒸餾水充分洗凈,A,液；,用,B,液沖去殘水，再加,B,液于玻片上覆蓋染色數(shù)秒至,1min,，必要時(shí)在酒精燈微火加熱直至顯褐色，立即用蒸餾水洗，自然干燥。,5.,鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。,菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。,第七頁(yè)，共十頁(yè)。,（二）壓滴法,1.,制備菌液：從幼齡菌斜面上，挑數(shù)環(huán)菌放在裝有,1,2mL,無(wú)菌水的試管中，制成輕度混濁的菌懸液。,2.,取,2,3,環(huán)稀釋菌液于潔凈載玻片中央，再加入一環(huán),0.01%,的美藍(lán)水溶液，混勻。,3.,用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，防止產(chǎn)生氣泡。,4.,鏡檢：將光線適當(dāng)調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細(xì)菌鞭毛運(yùn)動(dòng)和布朗運(yùn)動(dòng)，后者只是在原處左右擺動(dòng)，細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為有運(yùn)動(dòng)性。,第八頁(yè)，共十頁(yè)。,五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,繪圖表示鞭毛細(xì)菌的形態(tài)特征，并用箭頭表示其運(yùn)動(dòng)方向。,六、思考題,1.,鞭毛染色法準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌是否具有鞭毛要注意的細(xì)節(jié)。,2.,壓滴法中，發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)大量的細(xì)菌朝一個(gè)方向運(yùn)動(dòng)，原因何在？,第九頁(yè)，共十頁(yè)。,內(nèi)容總結(jié),鞭毛染色法及活菌活動(dòng)性觀察。細(xì)菌的鞭毛極纖細(xì)，直徑一般為0.10.2um，只有用電子顯微鏡才能觀察到。壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上，然后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。取出用清水沖洗，瀝干水后，置95%乙醇中浸泡，用時(shí)取出在火焰上燒去酒精。5.鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。3.用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，防止產(chǎn)生氣泡,第十頁(yè)，共十頁(yè)。,