2019年《生物技術(shù)制藥》作業(yè)題資料附答案

2019年生物技術(shù)制藥作業(yè)題資料附答案1. 什么是cDNA文庫？以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。2. 構(gòu)建cDNA文庫的基本步驟？1、mRNA的純化：2、cDNA第一鏈的合成；3、cDNA第二鏈的合成；4、cDNA的克隆；5、將重組體導(dǎo)入宿主細胞；6、cDNA文庫的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法3. 基因工程藥物制藥的主要程序有哪些？1、 目的基因的克隆2、構(gòu)建DAN重組體3、DAN重組體轉(zhuǎn)入宿主菌4、 構(gòu)建工程菌5、工程菌發(fā)酵6、表達產(chǎn)物的分離純化7、產(chǎn)品的檢驗等4. 什么是生物技術(shù)制藥？采用現(xiàn)代生物技術(shù),借助某些微生物、植物、動物生產(chǎn)醫(yī)藥品，叫作生物技術(shù)制藥。5. 舉例生物技術(shù)藥物，6例干擾素、白細胞介素、粒細胞集落刺激因子、紅細胞生成素、胰島素、乙肝疫苗6. 新型生物反應(yīng)器有哪些？新型生物反應(yīng)器有: 1.氣升式生物反應(yīng)器 2.流化床式生物反應(yīng)器 3.固定床式生物反應(yīng)器 4.袋式或膜式生物反應(yīng)器 5.中空纖維生物反應(yīng)器7. 生物技術(shù)藥物按照醫(yī)學(xué)用途有哪些分類？按照醫(yī)學(xué)用途分類：1.治療藥物 2.診斷藥物 3.預(yù)防藥物8. 生物技術(shù)藥物的特性有哪些？1.分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜 2.具有種屬特異性 3.治療針對性強，療效高 4.穩(wěn)定性差5.基因穩(wěn)定性6.免疫原性 7.體內(nèi)t1/2短 8.受體效應(yīng) 9.多效性和網(wǎng)絡(luò)性效應(yīng)10.檢驗的特殊性9. 適合目的基因表達的宿主細胞應(yīng)滿足哪些要求？1、 容易獲得較高濃度的細胞；2、能利用易得廉價原料；3、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素；4、 發(fā)熱量低、需氧低、適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細胞形態(tài)；5、容易進行代謝調(diào)控；5、 容易進行DNA重組技術(shù)操作；7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取純化10. 宿主細胞分為哪兩大類？第一類為原核細胞：常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、鏈霉菌等；第二類為真核細胞：常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動物細胞等。11. 大腸桿菌作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點？優(yōu)點：1 大腸桿菌生長迅速，分子遺傳學(xué)研究深入，目前是基因工程研究中采用最多的原核表達體系。2 表達基因產(chǎn)物形式多樣：細胞內(nèi)不溶性表達(包含體)、細胞內(nèi)可溶性表達、細胞周質(zhì)表達等。3 大腸桿菌中的表達不存在信號肽，產(chǎn)品多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取困難。缺點：4 因分泌能力不足，真核蛋白質(zhì)常形成不溶性的包含體，表達產(chǎn)物需經(jīng)變性、復(fù)性才恢復(fù)活性。5 蛋白質(zhì)不能糖基化。6 產(chǎn)物蛋白質(zhì)N端多余一個蛋氨酸（甲硫氨酸）殘基。7 其內(nèi)毒素很難除去。12. 酵母菌作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點？優(yōu)點：分泌能力強，能正確進行翻譯后加工（肽剪切糖基化）有成熟的發(fā)酵和后處理工藝。缺點：13. 哺乳動物細胞作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點？優(yōu)點：表達產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化細胞分泌到培養(yǎng)液中，純化容易。產(chǎn)物是糖基化的接近天然物。缺點：生長慢，生產(chǎn)率低，培養(yǎng)條件苛刻，費用高，培養(yǎng)液濃度稀。14. 影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素？外源基因表達產(chǎn)量與細胞濃度和單個細胞表達產(chǎn)量呈正相關(guān)。單個細胞產(chǎn)量取決于：外源基因的拷貝數(shù) 外源基因的表達效率 啟動子的強弱 核糖體接合位點的有效性 SD序列和起始密碼ATG的間距 密碼子組成表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性細胞代謝負荷工程菌的培養(yǎng)條件15. 動物細胞來源的藥物的種類有哪些？ 動物細胞多肽與蛋白質(zhì)類藥物多肽藥物 多肽激素 多肽類細胞因子 蛋白質(zhì)類藥物動物酶與輔酶類藥物促消化酶類消炎酶類治療心腦血管類疾病的相關(guān)酶抗腫瘤的酶與電子傳遞有關(guān)的治療酶其它藥用酶動物輔酶類藥物動物核酸類藥物動物糖類藥物：粘多糖類：甲殼素、硫酸軟骨素、肝素、透明質(zhì)酸動物脂類藥物16 動物細胞生產(chǎn)藥物的特點有哪些？1 哺乳動物細胞外源基因表達產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化的細胞分泌到培養(yǎng)液中，使產(chǎn)物易純化。2 基因產(chǎn)物糖基化接近天然產(chǎn)物。17 基因載體導(dǎo)入動物細胞的常用方法有哪些？18. 桿狀病毒載體的優(yōu)點？雙鏈DNA，易重組插入78kb DNA不影響正常病毒粒子的形成。多角體蛋白和病毒粒子的形成無直接關(guān)系，因此用外源基因更換多角體蛋白基因，仍能形成有感染力病毒粒子；多角體蛋白基因有非常強的啟動子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的20%30%；用光學(xué)顯微鏡可看到多角體，可以此作為標(biāo)記物，選陽性克隆。如用家蠶桿狀病毒，還可在蠶體表達外源基因19 什么是抗體，抗體是怎樣產(chǎn)生的？（1） 抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。（2） 抗體的產(chǎn)生：機體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，B淋巴細胞被活化增殖和分化為漿細胞，由漿細胞合成和分泌的球蛋白。20 什么是單克隆抗體（monoclonal antibody，McAb）針對一個抗原決定簇，由單一的B淋巴細胞克隆產(chǎn)生，具有高度特異性、均一性、來源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點的抗體。21 怎樣制備單克隆抗體（McAb）在細胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。22基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種主要表現(xiàn)形式是什么？基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的主要機制是什么？分裂不穩(wěn)定：指工程菌分裂時出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。含質(zhì)粒菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌的頻率（質(zhì)粒丟失率）；這兩種菌（含質(zhì)粒菌和不含質(zhì)粒菌）比生長速率差異的大小。23 動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些？各自的特點是什么？ 1.懸浮培養(yǎng):讓細胞自由的懸浮于培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖。 2.貼壁培養(yǎng):讓細胞貼附在某種基質(zhì)上生長繁殖的培養(yǎng)方法。 3.貼壁-懸浮培養(yǎng)（假懸浮培養(yǎng)）24. 改造后的鼠源性單克隆小分子抗體的類型及結(jié)構(gòu)特點？基因工程小分子抗體僅表達鼠源單抗的V區(qū)片段，相對分子量為原抗體的1/801/3。即保留CDR區(qū)，而Ig 分子中的C區(qū)不表達。小分子抗體類型有：Fab片段抗體Fv抗體（抗體可變區(qū)片段）單鏈抗體（scFv）單域抗體分子識別單位（MRU）25. 闡述對鼠源性單克隆抗體進行改造的目的是什么？鼠源性單克隆抗體，應(yīng)用人體時會產(chǎn)生人抗鼠抗體及毒副作用。通過DNA水平對對鼠源性的Ig基因進行切割、拼接或修飾的改造，可以降低免疫源性；降低相對分子量。更符合人類的需求。